斑馬魚(yú)腫瘤移植模型

服務(wù)介紹

通過(guò)構建腫瘤移植斑馬魚(yú)模型，能夠可靠的重現多種病人來(lái)源的腫瘤生長(cháng)，轉移和凋亡情況。斑馬魚(yú)通體透明的特點(diǎn)決定該模型能方便使用熒光標記進(jìn)行腫瘤研究。通過(guò)將斑馬魚(yú)模型用于臨床前治療效果的檢測，能夠快速進(jìn)行腫瘤體內分析實(shí)驗，為腫瘤病人的個(gè)性化治療奠定基礎。

腫瘤細胞體內增殖情況流程圖

腫瘤細胞體內藥效分析轉移流程圖

斑馬魚(yú)腫瘤異種移植優(yōu)勢

斑馬魚(yú)作為移植接受者，具有許多固有的特征使它成為理想的移植接受者。

1.    通過(guò)熒光標記移植細胞，可以很容易地追蹤移植的正?；驉盒约毎?，并且使用光學(xué)透明的斑馬魚(yú)品系作為受體，可以直接觀(guān)察移植情況。

2.    斑馬魚(yú)高度多產(chǎn)，成熟的雌性每周能產(chǎn)生數以百計的卵且很小，成千上萬(wàn)的斑馬魚(yú)可以保存在一個(gè)容器里，管理和維護成本相對較低于大、小鼠。當斑馬魚(yú)模型與大規模遺傳篩選和藥物發(fā)現平臺相結合時(shí)，這些研究為腫瘤內克隆、進(jìn)化和異質(zhì)性、治療耐藥、侵襲和轉移、造血和干細胞移植提供了有價(jià)值的見(jiàn)解。

技術(shù)流程

腫瘤細胞體內增殖技術(shù)流程

應用案例：

1.    利用斑馬魚(yú)人源腫瘤移植模型，進(jìn)行不同放化療方案抗腫瘤效果分析，通過(guò)分析移植后1dpi和3dpi的熒光情況，得到CG/DOX+5Gy組對腫瘤殺傷顯著(zhù)高于其他組，實(shí)驗周期不到1周。

備注：與對照組相比，CFSE熒光>5%、0-5%和熒光降低分別導致HeLa細胞數量增加、不變和減少。

2.    分析CAR-T對Raji細胞的轉移灶殺傷效果，通過(guò)卵黃囊間隙顯微注射，構建人源腫瘤移植模型，實(shí)驗組同時(shí)注射CAR-T細胞，注射后24h，分析斑馬魚(yú)頭部、軀干和尾部的腫瘤熒光面積，可見(jiàn)對轉移到析斑馬魚(yú)頭部、軀干和尾部的Raji細胞殺傷效果顯著(zhù)。

參考文獻：

1.    Wu SY, Chou HY, Yuh CH, Mekuria SL, Kao YC, Tsai HC. Radiation-Sensitive Dendrimer-Based Drug Delivery System. Adv Sci (Weinh). 2017 Dec 5;5(2):1700339.（IF=15.84）

2.    He X, Yin X, Wu J, Wickstr?m SL, Duo Y, Du Q, Qin S, Yao S, Jing X, Hosaka K, Wu J, Jensen LD, Lundqvist A, Salter AI, Br?utigam L, Tao W, Chen Y, Kiessling R, Cao Y. Visualization of human T lymphocyte-mediated eradication of cancer cells in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020 Sep 15;117(37):22910-22919. （IF=9.412）

常見(jiàn)問(wèn)題

1.    斑馬魚(yú)胚胎顯微注射實(shí)驗操作方法

斑馬魚(yú)顯微注射是將實(shí)驗材料直接注射到1-4細胞期的斑馬魚(yú)胚胎中，由于在這個(gè)胚胎發(fā)育早期沒(méi)有膜分隔細胞和卵黃，注入1個(gè)細胞或卵黃的溶液將擴散到整個(gè)胚胎中。通過(guò)注射不同類(lèi)型的實(shí)驗樣品，實(shí)現基因的瞬時(shí)過(guò)表達、敲降、以及制備轉基因或突變斑馬魚(yú)品系等研究。

2.    顯微注射的注意事項

顯微注射的操作過(guò)程中有許多細節影響實(shí)驗的成功率，主要包括以下幾方面。

1)     注射樣品的質(zhì)量和和濃度，注射劑量1nl/embryo。

2)     注射前小心將顯微注射針定位，注射針定位到卵表面的注射角度是穿透堅硬的卵殼注射成功的關(guān)鍵。

3)     破針時(shí)，將針尖一點(diǎn)點(diǎn)剪斷，不宜一次剪太多。

4)     注射時(shí)注射器的壓力不宜變化太快，否則會(huì )造成注射量操作難以控制，導致胚胎內環(huán)境改變過(guò)快過(guò)大甚至脹破細胞。氮氣罐的壓力閥顯示氣體的壓力，壓力為0表明罐內無(wú)氣體，需要及時(shí)換氣。

5)     注射完畢，慢慢抽出注射針，避免受精卵內物質(zhì)隨著(zhù)毛細針抽出，造成受精卵的損傷。

6)     注射后的胚胎需要細心照顧，控制溫度、水質(zhì)和養殖密度。