類(lèi)器官基因編輯科研服務(wù)

項目介紹

體外培養為基因編輯應用提供了高通量的實(shí)驗可能性，并且更容易操作。重要的是，基因編輯能夠進(jìn)行可操控的設置：通過(guò)調節培養基組分中的信號分子來(lái)引入和選擇精確的突變?；蚓庉嫾毎捏w外培養，能夠篩選出所需突變的克隆，并將其擴增為細胞系，這在動(dòng)物模型中是不可能實(shí)現的。

服務(wù)流程

文獻案例

1.    2022年6月Gastric Cancer上發(fā)表，利用基本編輯技術(shù)，敲除了正常胃癌類(lèi)器官的CDH1基因，構建了e-鈣粘蛋白敏感的人胃類(lèi)器官模型，發(fā)現敲除后的腫瘤類(lèi)器官與SRCC的細胞形態(tài)和細胞活力類(lèi)似。

2.    2020年3月，Nature Cell Biology雜志上發(fā)表文章，利用非同源依賴(lài)的CRISR-Cas9技術(shù)快速高效地對人源類(lèi)器官進(jìn)行基因敲入（CRISPR–HOT)，為人源類(lèi)器官的內源基因敲入提供了重要的工具平臺。通過(guò)讓癌基因TP53失去功能，發(fā)現異常肝細胞的非結構化分裂更為頻繁。使用CRISPR-HOT將熒光標記插入人類(lèi)類(lèi)器官的DNA中，建立了人肝臟導管類(lèi)器官的報告基因品系，可以利用活體成像、切片染色等方式可視化觀(guān)察內源表達的基因表達模式以及動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。

參考文獻：

[1]Yamaguchi K , Yoshihiro T , Ariyama H ,et al.Potential therapeutic targets discovery by transcriptome analysis of an in vitro human gastric signet ring carcinoma model[J].Gastric Cancer, 2022, 25(5):862-878.

[2]Artegiani B, Hendriks D, Beumer J, et al. Fast and efficient generation of knock-in human organoids using homology-independent CRISPR-Cas9 precision genome editing. Nat Cell Biol. 2020;22(3):321-331.

常見(jiàn)問(wèn)題

1.    類(lèi)器官的形態(tài)在培養過(guò)程中發(fā)生變化的原因有哪些？

在常規的培養條件下，形態(tài)應當保持一致。

培養物形態(tài)變化可能反映出培養條件的問(wèn)題：

?   ECM：確保使用了特定模型的ECM，并且稀釋至正確的終濃度。

?   培養基：確保使用正確的培養基配方，且保存條件適當。確保緩沖液更換頻率和體積正常。培養密度：多次傳代或放大培養規模時(shí)，類(lèi)器官的密度要保持一致。

?   傳代頻率：按照一致的傳代時(shí)間表來(lái)維持類(lèi)器官。